FAQ
PC linker（光可断裂连接臂，photocleavable linker）是一类邻硝基苄基结构的连接基团，广泛用于光裂解生物素、光可控释放标签与合成寡核苷酸的亲和纯化。「该用哪盏灯、照多久」是这个实验里被问得集中的两个问题。结论先行：适配 302nm 中波或 365nm 长波紫外灯——经典文献用的正是 XX-15 这类台式三波长紫外线灯；照射时间从约 4 分钟到 30 分钟不等，由灯的辐照强度、linker 类型与样品形态共同决定。
邻硝基苄基类 PC 基团的吸收落在近紫外区（300–365nm），两类光源都有充分依据：
站内XX-15 实验室用管式紫外线灯为双管结构，254/302/365nm 三种波长可选，切换灯管即可覆盖这两类光解需求。
断裂时间主要由到达样品表面的辐照强度决定。文献与厂商资料给出的参考值：
实操上建议先照 5 分钟取样，用 HPLC 或变性凝胶看断裂效率，不足再补照，比一次照满更稳妥。
254nm 深紫外虽也能断开 PC 基团，但它会在核酸上诱导胸腺嘧啶二聚体，直接损伤样品。厂商指南明确提示：若使用更强的深紫外光源，需要加装 300nm 截止滤光片来保护 DNA。因此光解请把灯切到 302nm 或 365nm 挡，不要用 254nm。
美国路阳 XX-15/XX-20 实验室用管式紫外线灯：双管结构，254/302/365nm 三种波长可选，XX-15 为 2×15W、25cm 处 1650 μW/cm²，铝外壳可吊挂，短波灯管可翻转。PC linker 光解、凝胶观察切割、台面灭菌，一台即可覆盖。手里是 XX-15A 等同系列型号的用户，波段选择与照射时间逻辑与本文一致。
两个波段都能断开邻硝基苄基，差别在效率与风险。302nm 光子能量高、断裂快，文献中约 4 分钟即可从固相上定量释放；但它会诱导胸腺嘧啶二聚体，适合短时照射、对样品完整性要求不高的场合。365nm 更温和，1mW/cm² 强度下约 10 分钟完成断裂，适合后续还要做酶反应、连接或测序的样品。拿不准时先用 365nm，效率不够再切到 302nm。
辐照度随距离近似按平方反比衰减，25cm 处的强度只有 12.5cm 处的四分之一。XX-15 在 25cm 处标称 1650 μW/cm²，常规做法是保持 10–25cm 的照射距离；需要定量时用紫外照度计实测样品位置的辐照度，把「照多久」换算成「照多少剂量」，条件才能在不同实验室复现。
302nm 中波会被普通玻璃和多数塑料明显吸收，光解请用石英皿、透紫外培养皿，或直接在敞开的小孔板里进行；365nm 对容器宽容一些，普通透明塑料短时照射可以接受，但长时间照射仍建议改用透紫外材质，否则实际到达样品的剂量会打折。
取样做 HPLC 或变性聚丙烯酰胺凝胶，看原料峰与原料带是否消失、释放产物是否到位。实操上建议先照 5 分钟取样，不足再补照 5–10 分钟，比一次照满更可控。另外，仍挂在 CPG 固相载体上的寡核苷酸光解效率只有 5–10%，应先从载体上切脱下来再照。
立即避光：转移到棕色管或包铝箔，避免转运和台面灯光再次曝光。释放 3'-磷酸寡核苷酸的效率与 pH 相关，pH 9.4 条件下高于 pH 7.4，缓冲液要按后续反应的要求配。光解产物建议短期内用完，不建议长期存放。
小体积、短时间可以应急，但手持光源的辐照度不稳定、光斑不均匀，重复性差；而且距离一变强度就变，时间条件无法固化。需要定量、批量处理或写进方法学时，用 XX-15 / XX-15A 这类管式灯固定照射距离，再配合照度计记录辐照度更可靠。
